En química, la dilución es el proceso de reducir la concentración de una sustancia en una solución. La dilución de cadena es la dilución repetida de una solución para aumentar rápidamente el factor de dilución. Este procedimiento generalmente se realiza en experimentos que requieren soluciones muy diluidas con alta precisión. Por ejemplo, experimentos que involucran curvas de concentración en una escala logarítmica o experimentos para determinar la densidad de bacterias. Las diluciones en cadena se utilizan ampliamente en experimentos científicos como bioquímica, microbiología, farmacología y física.
Paso
Método 1 de 2: Realización de una dilución básica
Paso 1. Determine la solución diluyente adecuada
Es muy importante determinar el líquido que se utilizará para la dilución. Muchas soluciones son solubles en agua destilada, pero no siempre es así. Si está diluyendo bacterias u otras células, hágalo en un medio de cultivo. El líquido que elija se utilizará para todas las diluciones de cadena.
Si tiene dudas sobre qué diluyente usar, busque ayuda o busque en línea. Busque ejemplos de otros que hayan realizado diluciones de cadena similares
Paso 2. Prepare varios tubos de ensayo que contengan 9 ml de diluyente
Los tubos de ensayo se utilizan para diluciones vacías. Primero, coloque la muestra sin diluir en el primer tubo, luego haga las diluciones en sucesión a los siguientes tubos.
- Etiquete todos los tubos utilizados antes de comenzar la dilución para que no se confunda una vez que se esté ejecutando el experimento.
- Cada tubo se llenará con 10 diluciones, partiendo del tubo cuya sustancia no se haya diluido. La dilución en el primer tubo es 1:10, seguida de 1: 100 en el segundo tubo, 1: 1000 para el tercero, y así sucesivamente. Determine de antemano la cantidad de dilución que se debe realizar, para no desperdiciar la solución diluyente.
Paso 3. Prepare un tubo de ensayo que contenga al menos 2 ml de solución sin diluir
La cantidad mínima de solución a diluir requerida para realizar esta dilución de cadena es 1 mL. Si usa solo 1 ml, no quedará solución sin diluir. Etiquete BLM para soluciones sin diluir.
Mezcle bien la solución antes de comenzar cualquier dilución
Paso 4. Realice la primera dilución
Tome 1 ml de la solución sin diluir del tubo de ensayo BLM con una pipeta y colóquelo en un tubo de ensayo etiquetado 1:10 que contenga 9 ml de diluyente, luego mezcle bien. Ahora hay 1 ml de la solución sin diluir en 9 ml del diluyente. Por tanto, la solución se ha diluido con un factor de dilución de 10.
Paso 5. Realice la segunda dilución
Para la segunda dilución, tome 1 mL de la solución del tubo 1:10, luego colóquelo en el tubo 1: 100 que también contiene 9 mL del diluyente. Asegúrese de que la solución en el tubo 1:10 esté completamente mezclada antes de agregarla al siguiente tubo. Nuevamente, asegúrese de que la dilución en el tubo 1: 100 esté completamente mezclada. La solución del tubo 1:10 se diluyó 10 veces en el tubo 1: 100.
Paso 6. Continúe con este procedimiento para realizar diluciones de cadena más largas
Este proceso se puede repetir tantas veces como sea necesario para obtener la concentración de solución deseada. En experimentos que utilizan curvas de concentración, puede realizar diluciones en cadena para producir una serie de soluciones con diluciones de 1, 1:10, 1: 100, 1: 1000.
Método 2 de 2: Calcular el factor de dilución y la concentración final
Paso 1. Calcule la proporción de la última dilución en la cadena de dilución
La relación de dilución total se puede determinar multiplicando el factor de dilución de cada paso al paso final. La ilustración matemática es con la fórmula Dt = D1 x D2 x D3 x… x D , Dt es el factor de dilución total y D es la relación de diluyente.
- Por ejemplo, digamos que haces una dilución 1:10 4 veces. Inserte el factor diluyente en la fórmula: Dt = 10 x 10 x 10 x 10 = 10,000
- El factor diluyente en el cuarto tubo en esta cadena de dilución es 1: 10,000. La concentración de la sustancia después de la dilución es 10,000 veces menor que antes de diluirla.
Paso 2. Determine la concentración de la solución después de la dilución
Para determinar la concentración final de una solución después de una dilución en cadena, debe conocer su concentración inicial. La fórmula es Cfin = Ccomienzo/ D, Cfin es la concentración final de la solución diluida, Ccomienzo es la concentración inicial de la solución original y D es la proporción de dilución predeterminada.
- Por ejemplo: si comienza con una solución celular cuya concentración es 1,000,000 de células por mL y la proporción de dilución es 1,000, ¿cuál es la concentración final de la muestra diluida?
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Usando la fórmula:
- Cfin = Ccomienzo/D
- Cfin = 1.000.000/1.000
- Cfin = 1000 células por mL.
Paso 3. Asegúrese de que todas las unidades sean iguales
Al realizar cualquier cálculo, asegúrese de que las unidades sean siempre las mismas al final del cálculo. Si la unidad inicial son células por ml, asegúrese de que las unidades sigan siendo las mismas al final del cálculo. Si la concentración inicial es partes por millón (bpd), entonces la concentración final también debe estar en unidades bpj.
